%0 Journal Article
%T 苯丙氨酸促进人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞高效分化的研究
%A 于敏
%A 李筱荣
%A 杨春波
%J -
%D 2015
%R doi:10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.01.015
%X 目的观察苯丙氨酸对胚胎干细胞（ESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞定向分化诱导效率的影响。 方法H1人ESC（hESC）分为对照组和实验组，以mTeSR培养基常规培养。细胞克隆过度融合后对照组以撤除碱性成纤维细胞生长因子、含10% knockout血清替代物的培养基诱导hESC自主分化至第7周。实验组从第3周开始在诱导培养基中添加0.2 mmol/L苯丙氨酸培养至第7周。观察两组细胞形态学变化；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测人类配对盒基因6（Pax6）、小眼球相关转录因子（MITF）、RPE65、酪氨酸酶（tyrosinase）、Wnt配体（Wnt3a）、淋巴样增强因子-1（Lef1）、转录因子7（Tcf7）基因mRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测MITF、RPE65蛋白的表达；流式细胞技术（FCM）检测RPE65阳性细胞比例。Sprague Dawley大鼠12只，随机分为对照组和治疗组；单眼内路法视网膜下腔注射，对照组注射2μl 1倍磷酸盐缓冲液，治疗组注射2μl纯化的hESC-RPE。治疗后6周行视网膜电图（ERG）检查，观察暗适应3.0 a-b波振幅。 结果诱导分化第7周，实验组出现大量肉眼可见的色素团块，明显多于对照组。色素化区域内可见多边形蜂窝状排列的单层细胞，胞质充满色素颗粒。RT-PCR检测结果显示，实验组Pax6、MITF、RPE65、tyrosinase（t=39.44、26.14、31.28、77.24）、Wnt3a、Lef1、Tcf7（t=46.11、27.69、17.42）mRNA表达量高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。Western blot检测结果显示，实验组MITF、RPE65蛋白表达量高于对照组。FCM检测结果显示，实验组、对照组RPE65阳性比例分为（18.91±1.76）%、（0.88±0.09）%；实验组RPE65阳性比较明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。ERG检查结果显示，治疗组大鼠暗适应3.0 a-b波振幅较对照组显著提高，差异有统计学意义（t=7.543，P＜0.01）。 结论苯丙氨酸显著提高hESC向RPE定向诱导效率。hESC诱导来源的RPE细胞视网膜下移植能改善视网膜变性模型动物视功能
%K 苯丙氨酸/药物作用
%K 胚胎干细胞
%K 细胞分化
%K 视网膜色素上皮
%U http://www.coretina.com:80/article/10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.01.015