%0 Journal Article
%T 滑膜间充质干细胞成纤维软骨分化条件初步探索
%A 丁喆如
%A 丛锐军 Δ
%A 吴宇黎
%A 吴海山
%A 周琦
%A 张雷
%A 李林涛
%A 许震宇
%A 陈松
%J -
%D 2015
%R doi:10.7507/1002-1892.20150018
%X 目的采用正交实验研究滑膜间充质干细胞（synovial derived MSCs,SMSCs）成纤维软骨分化的条件。 方法5只成年新西兰白兔，活检取滑膜组织。贴壁法获取SMSCs后采用流式细胞仪及成脂、成骨、成软骨诱导分化鉴定。根据预实验与文献综述寻找与SMSCs成纤维软骨分化可能相关的条件，采用缺失实验初筛必要条件后，TGF-β1、BMP-2、地塞米松、脯氨酸、柠檬酸（ascorbic acid,ASA）、丙酮酸、胰岛素+转铁蛋白+亚硒酸预混液、牛血清白蛋白、bFGF、间断静水压、BMP-7、IGF纳入正交实验，采用SPSS18.0统计软件设计L60（212）正交实验及表头，定义2水平条件，在SMSCs-三维小肠黏膜下层（small intestinal submucosa,SIS）支架上诱导成纤维软骨分化。使用流式细胞仪计数，检测CD151+/CD44+细胞并记录SMSCs向纤维软骨分化的转换率，采用免疫组织化学染色，结合细胞形态、甲苯胺蓝染色、半定量RT-PCR检测SOX9、聚集蛋白聚糖、Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,Col Ⅰ）、ColⅡ、Col Ⅸ基因表达，进一步验证结果。检验指标rate是CD151+/CD44+细胞与高表达ColⅠ细胞的比例乘积。同时采用PicoGreen Assay测量细胞总DNA量，以反映细胞扩增情况。正交实验结果采用直观观察和主体间方差分析方法，考虑部分因子间的1阶交互作用，组间差异采用LSD和q检验验证，使用Ⅲ型平方和校正模型，检验水准α=0.05。 结果实验获取的细胞为SMSCs，细胞倍增时间为28 h。成纤维软骨分化过程中SMSCs-三维SIS支架体积5 d倍增，14 d后得到甲苯胺蓝染色阳性的细胞-支架复合物。正交实验结果直观分析示，TGF-β1对成纤维软骨分化转化率的作用最明显，BMP-7采用水平2有利于得到更高的转化率，但与BMP-2存在交互作用；其余第1区组水平值加和高于22.5的因子有DEX、ASA、ITS、转铁蛋白、bFGF，模型的相关性好。方差分析校正模型P=0.000，能够满足实验设计；截距P=0.000，说明各因子对因变量影响差异不完全相同。TGF-β1、ASA、bFGF、IGF对因变量调控作用较其他因子显著，差异有统计学意义，与直观观察结果相似。 结论TGF-β1、ASA、bFGF、IGF显著影响SMSCs成纤维软骨分化，通过合理调整上述因子浓度，可显著提高SMSCs成纤维软骨分化转化率；精确的调控条件和调控机制有待进一步探索
%K 滑膜间充质干细胞
%K 纤维软骨细胞
%K 正交实验
%K 分化条件
%U http://www.rrsurg.com:80/article/10.7507/1002-1892.20150018