%0 Journal Article
%T 携带肝细胞生长因子基因慢病毒转染人脂肪来源干细胞复合纤维蛋白胶支架构建可注射型组织工程脂肪的实验研究
%A 吴舒
%A 张静
%A 易阳艳
%A 王朝慧
%A 阳水发
%J -
%D 2017
%R doi:10.7507/1002-1892.201704094
%X 目的探讨构建可注射型组织工程脂肪的可行性，为临床软组织缺损修复及美容填充提供简便易行的方法。方法取脂肪抽吸术获取的脂肪组织，采用酶消化法分离培养获得人脂肪来源干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs），进行细胞形态观察、流式细胞术及成脂诱导鉴定。用携带肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的慢病毒 HGF-GFP-LVs，以不同感染复数（multiplicity of infection，MOI）（分别为 10、30、50、100）转染 hADSCs，计算转染效率以确定最适 MOI。取 SPF 级 6 周龄单纯 T 细胞缺陷 BALB/c 雌性裸鼠 10 只，将经过最适 MOI HGF-GFP-LVs 转染并成脂诱导的 hADSCs 与纤维蛋白胶混合注入裸鼠背部右侧皮下（转染组），单纯成脂诱导的 hADSCs 与纤维蛋白胶混合注入背部左侧皮下（未转染组），单纯纤维蛋白胶注入颈后正中皮下（空白对照组），每点注射 0.4 mL。移植后 12 周处死裸鼠，取出移植物，行大体观察、湿重测量、HE 染色、GFP 荧光标记检测及免疫荧光染色观察，评价种子细胞的体内成脂能力以及移植物血管新生情况。结果经鉴定所培养细胞为 hADSCs。MOI 为10 和 30 时 HGF-GFP-LVs 转染率较低，MOI 为50 和 100 时转染率较高（均>80%），确定最适 MOI 为 50。移植 12 周，转染组和未转染组均获得外观类似脂肪组织的新生物，湿重分别为（32.30±4.06）mg 和（25.27±3.94）mg，差异有统计学意义（t=3.929，P=0.001）；空白对照组未见新生物。转染组新生脂肪细胞数为（126.93±5.36）个/视野，显著高于未转染组的（71.36±4.52）个/视野（t=30.700，P=0.000）。荧光显微镜下可见部分单房脂肪细胞发出网状绿色荧光。免疫荧光染色示转染组血管密度为（16.37±2.76）个/视野，显著高于未转染组的（9.13±1.68）个/视野（t=8.678，P=0.000）。结论以 hADSCs 为种子细胞，经慢病毒转染 HGF 基因并成脂诱导后与纤维蛋白胶支架复合可在体内成功构建成熟脂肪，能促进移植后的血管新生，从而提高移植物的存活率
%K 组织工程脂肪
%K 人脂肪来源干细胞
%K 纤维蛋白胶
%K 肝细胞生长因子
%K 慢病毒
%K 基因转染
%K 裸鼠
%U http://www.rrsurg.com:80/article/10.7507/1002-1892.201704094