%0 Journal Article
%T 番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备
%A 尚卫娜
%A 张洁
%A 董家红
%A 郑宽瑜
%A 郑雪
%J -
%D 2017
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0242
%X 摘要 通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒（Tomato zonate spot virus,TZSV）Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21（DE3）,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting 检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验
%K 番茄环纹斑点病毒
%K Gn蛋白
%K 原核表达
%K 抗血清
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract11658.shtml