%0 Journal Article
%T 人FGFR1的BacMam系统构建、表达、纯化与鉴定
%A 孟俊炜
%A 方成
%A 武艺
%A 罗志勇
%A 陈艳霞
%J -
%D 2012
%X 摘要 目前激酶类蛋白的表达大多由昆虫细胞表达系统实现,采用BacMam系统来表达受体型酪氨酸激酶人FGFR1,旨在获得更接近天然结构与功能的重组蛋白。首先,将pDEST20载体的多角体蛋白启动子替换成CMV enhancer启动子,获得BacMam表达载体pDEST20-CMVe。通过Gateway系统,将FGFR1具有酪氨酸激酶活性的区域克隆至改造后的载体中。利用昆虫细胞Sf9产生病毒,P2代病毒转导哺乳动物细胞FreeStyle 293-F进行表达,经亲和纯化后,成功获得了75 kD的融合蛋白。通过磷酸化底物的反应检测此FGFR1激酶的活性。结果表明,BacMam系统是一个良好的表达重组激酶FGFR1的平台,并且所表达的激酶活性高于昆虫细胞表达的激酶蛋白
%K BacMam
%K 载体构建
%K 蛋白表达
%K 激酶活性
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract6585.shtml