%0 Journal Article
%T 利用间隔肽促进S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达
%A 储炬
%A 钱江潮
%A 秦秀林
%J -
%D 2013
%X 摘要 S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 是所有生物体中都存在的一种重要分子, 对维持生物体功能具有重要的作用, 已经被广泛地用于治疗肝脏疾病、关节炎和忧郁症等多种疾病。利用巴斯德毕赤酵母KM71构建基因工程菌K/9KM, 在AOX1启动子调控下分泌表达达观链霉菌(Streptomyces spectabilis) 来源SAM合成酶(MAT) 。为促进MAT的分泌, 在信号肽Kex2p切割位点后引入间隔肽G-Spacer(NTTEEGEPK) , 构建重组菌K/GM, 其重组蛋白(GM) 表达量达到84.7 mg/L, 分泌效率提高了92%, MAT比酶活提高了58%。在重组蛋白GM的C端融合表达His-tag, 构建重组蛋白GMH表达重组菌K/GMH, GMH的MAT比酶活比GM下降13%, 但分泌效率无显著改变。因此, 间隔肽G-Spacer对MAT的酶活及分泌有显著的促进作用, 而His-tag会降低MAT的酶活力但不影响其分泌效率。所构建的MAT分泌表达基因工程菌K/GMH, 在目的蛋白C端融合表达His-tag可减少分离纯化步骤和产物损失, 易于酶促转化法生产SAM
%K S-腺苷甲硫氨酸合成酶
%K 分泌表达
%K 毕赤酵母
%K 间隔肽
%K 异源表达
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract9873.shtml