%0 Journal Article
%T 家蝇肽聚糖识别蛋白（PGRP-SA）的克隆表达及细菌结合研究
%A 修江帆
%A 吴建伟
%A 尚小丽
%A 彭建
%A 王宇
%A 王涛
%A 胡亚
%A 罗嫚
%J -
%D 2016
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.022
%X 摘要 对家蝇PGRP-SA 基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇（Musca domestica）幼虫cDNA 质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA 质粒为模板设计引物,通过PCR 扩增,获得PGRP-SA 基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建pET-28a（+）-PGRP-SA重组质粒,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量RT-PCR 检测PGRP-SA在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明,PGRP-SA基因ORF 全长615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量22.8 kD,等电点9.11,具有保守的PGRP结构域。成功构建了pET-28a（+）-PGRP-SA重组质粒,蛋白经IPTG 诱导后在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,利用Western blot 检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达,血淋巴组织中表达量最高,后肠无表达,由此说明PGRP-SA基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合,与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇PGRP-SA蛋白,证实家蝇PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合
%K 家蝇
%K 先天免疫
%K 肽聚糖识别蛋白
%K 原核表达
%K 微生物结合实验
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract11226.shtml