%0 Journal Article
%T 银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析
%A 刘云华
%A 周秋虎
%A 常振战
%A 张灵芝
%J -
%D 2012
%X 摘要 植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性
%K 银胶菊(Parthenium argentatum)
%K 丙二烯氧化物合成酶
%K 细胞色素P450
%K 表达纯化
%K 酶活性分析
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract6528.shtml