%0 Journal Article
%T 利用CRISPR/Cas9技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除稳定细胞株
%A 应研敏
%A 张墨
%A 李鹏程
%A 白义春
%A 白朝辉
%A 许宏鑫
%A 王松
%J -
%D 2020
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0919
%X 摘要 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建大鼠L2细胞α-ENaC基因敲除的细胞株,研究α-ENaC基因对细胞增殖的影响。构建敲除α-ENaC基因的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,通过转染和嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株,Western Blot、测序确定突变的细胞株,CCK-8检测突变细胞株的增殖活力。成功构建靶向α-ENaC基因第一外显子的CRISPR/Cas9表达载体和筛选报告载体,嘌呤霉素筛选后,挑选8个单细胞克隆中有两个单细胞克隆α-ENaC蛋白表达下降,一个单细胞克隆α-ENaC蛋白不再表达,测序结果显示3个单细胞克隆分别为2个单等位基因突变和1个双等位基因突变,且未发现脱靶现象。突变细胞株的增殖活力降低,其中双等位基因突变细胞株增殖活力降低更为显著。因此,利用CRISPR/Cas9结合SSA-RPG报告载体成功获得了α-ENaC基因敲除的L2细胞株,α-ENaC与细胞增殖有关
%K L2细胞
%K α-ENaC
%K CRISPR/Cas9
%K 基因敲除
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract12641.shtml