%0 Journal Article
%T 高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统的构建
%A 刘芳
%A 崔古贞
%A 廖永慧
%A 张峥嵘
%A 洪伟
%A 王彩霞
%A 綦廷娜
%A 蔡梦迪
%A 谷俊莹
%A 陈峥宏
%A 陈相好
%J -
%D 2019
%R 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0883
%X 摘要 构建高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。将来源于pET28a的T7-lac操纵子与来源于pSY6的II型内含子组装构建大肠杆菌IPTG诱导型Targetron质粒系统。以lacZ基因为例,选择lacZ-635s和lacZ-1063a两个位点为靶位点,利用构建的IPTG诱导型Targetron系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后II型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG诱导型Targetron系统严谨性和打靶效率。最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。在没有IPTG诱导时,II型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG诱导45 min时,其在lacZ-635s位点的打靶效率提高到90.8±5.5%,在lacZ-1063a位点的打靶效率提高到92.6±2.4%。成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统,旨为II型内含子的机理研究及应用奠定基础
%K Targetron
%K II型内含子
%K 诱导系统
%K 大肠杆菌
%K lacZ
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract12321.shtml