%0 Journal Article
%T IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测
%A 傅刘鹏
%A 徐俊
%A 杜军
%A 蔡绍晖
%A 邱胜红
%A 马锦珊
%A 黄思超
%J -
%D 2009
%X 摘要 旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显着的抑制活性(P<0.01)。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具
%K IκBα
%K 缺失突变体
%K 载体构建
%K NF-κB
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract5172.shtml