%0 Journal Article %T 一种用于提高基因打靶效率的双荧光筛选策略 %A 任红艳 %A 刘西梅 %A 华文君 %A 周黎 %A 杨烨 %A 欧阳艳 %A 毕延震 %A 綦世金 %A 郑新民 %A 陈建武 %J - %D 2017 %R 10.13523/j.cb.20170109 %X 同源重组介导的基因打靶技术因其准确性高、引入的突变可以预测,已经成为功能基因组研究的重要工具。但是在真核生物体内,天然同源重组的概率极低,对后续的筛选和鉴别造成很大困扰。因此,建立一个广谱性的高效筛选策略极为重要。研究基于“双荧光”的可视化筛选,通过提高筛选效率,从而建立了一种显著提高同源重组打靶效率的新策略。该策略以绿色荧光蛋白基因和新霉素基因为正筛选标记,以红色荧光蛋白基因为负筛选标记。经过G418筛选后,挑取仅表达绿色荧光蛋白的抗性克隆,用于跨界PCR检测。研究尝试运用上述新策略,借助CRISPR/Cas9技术,对猪肌抑素基因进行同源重组介导的基因打靶。在选取的T1和T2两个靶位点处,“双荧光”策略筛选的细胞阳性率分别达到80.5%和86.7%,筛选效率得到显著提高。研究建立的“双荧光”可视化筛选策略具有高效性和广谱性,在动物基因编辑领域具有广阔的应用前景 %K 肌抑素 %K CRISPR/Cas9 %K 基因打靶 %K 同源重组 %U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract5798.shtml