%0 Journal Article
%T 单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用
%A 任红艳
%A 张佳兰
%A 徐振宇
%A 李莉
%A 毕延震
%A 郑新民
%J -
%D 2017
%R 10.13523/j.cb.20170211
%X 单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增，因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素。利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液（SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液）分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解，并直接作为模板进行PCR扩增，结果表明：NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好，其扩增效率为95%；其次为Tween-20细胞裂解液，其扩增效率为65%；SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带。结合显微注射技术对sgRNA靶点活性进行检测，结果表明利用单细胞PCR结合显微注射的方法，在受精卵内对CRISPR/Cas9靶点活性进行检测确实可行，检测结果真实可靠
%K 基因修饰动物
%K 细胞裂解液
%K 靶点活性检测
%K 单细胞PCR
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract5816.shtml