%0 Journal Article
%T PEG-重组酵母尿酸酶结合物的基本特性研究
%A 何义国
%A 姚兴川
%A 孟延发
%A 杜林方
%A 赵兴秀
%A 赵兴秀 何义国 姚兴川 杜林方 孟延发
%J -
%D 2009
%X 重组Candida utilis尿酸酶由含PET-Uricase表达质粒的重组E.coli JM109(DE3)经乳糖诱导表达，菌体破碎后依次经过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析可以获得纯度95%的重组尿酸酶。还原性SDS-PAGE和HPLC测得其亚基表观分子量和天然分子量分别约为33 kDa和130 kDa。获得的纯酶与20 kDa (mPEG)2 -Lys-NHS在特定的条件下反应合成PEG-重组酵母尿酸酶结合物,考察了重组酵母尿酸酶PEG化前后的基本性质，结果显示PEG化尿酸酶的最适pH为7.5，较修饰前下降了1个pH单位，酸碱稳定范围与修饰前类似，都在pH 6-10范围内稳定；修饰前后最适温度均为40℃，重组酵母尿酸酶的热稳定性和抗蛋白酶水解能力较PEG修饰前有较大提高；PEG化尿酸酶可保留修饰前酶活力的87.5%；在最适条件下，PEG-尿酸酶结合物的Km为3.57×10-5 mol/L，而修饰前测得的Km为3.91×10-5 mol/L。研究结果为深入探讨PEG化尿酸酶的结构与功能奠定了基础
%K Candida utilis
%K 尿酸酶
%K PEG化尿酸酶
%K 蛋白质化学修饰
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract2148.shtml