%0 Journal Article
%T 带His-tag的解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2在毕赤酵母中的表达及纯化
%A 孙永川
%A 申旭光
%A 纪昌涛
%A 赵鹤云
%A 闫云君
%A 孙永川
%A 汪小锋
%A 申旭光
%A 纪昌涛
%A 赵鹤云
%J -
%D 2011
%X 将去自身信号肽并且N-端带6×His标签的YlLip2基因克隆至表达载体pPIC9K中,电转化GS115获得高效表达脂肪酶His6-YlLip2的基因工程菌。筛选到的阳性克隆子摇瓶发酵脂肪酶活力最高为400U/ml。对重组毕赤酵母在10 L发酵罐中表达His6-YlLip2的分批补料发酵工艺进行了初步优化,探讨了培养基、pH、温度对生物量和重组蛋白表达量的影响。结果表明:采用FM22培养基,诱导温度为25℃,pH 5.0,甲醇诱导114 h后His6-YlLip2的最高酶活力达到3160U/ml。SDS-PAGE分析表明,蛋白的分子量大约为38kDa。重组的His6-YlLip2经镍柱一步纯化后的纯度达到95.43%,比酶活达到4250U/mg
%K 毕赤酵母
%K 解脂耶氏酵母
%K 组氨酸标签
%K 高密度发酵
%K 脂肪酶
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract2052.shtml