%0 Journal Article
%T 增殖细胞核抗原蛋白在Spodoptera frugiperda昆虫细胞中的表达及纯化 *
%A 刘晓红
%A 刘琴
%A 娄颖
%A 张元兴
%A 陈军军
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20180703
%X 目的:利用昆虫细胞表达系统生产重组的人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA),并进行纯化和抗体结合特性鉴定。方法:以HeLa细胞逆转录的cDNA为模板,扩增人PCNA基因,并插入杆状病毒载体AcMNPV。利用昆虫细胞得到PCNA基因的重组杆状病毒。病毒感染细胞表达蛋白,联合镍柱亲和层析和离子交换层析获得高纯度的重组人PCNA蛋白。ELISA法测定抗体结合特异性。结果:以HeLa细胞cDNA为模板得到的基因序列同GenBank的人PCNA基因序列一致。草地贪夜蛾细胞(Spodoptera frugiperda, Sf9)表达重组人PCNA(recombinant human PCNA, rPCNA)的最佳感染值(MOI)和感染时间分别为0.05h和144h。rPCNA的产量高达110mg/L细胞,纯度> 95%。间接ELISA法检测抗体结合特性,rPCNA的敏感性和特异性分别为93.3%和85.0%。结论:建立了rPCNA的表达和纯化方法,获得了高效表达、高度抗体结合特异性的PCNA蛋白,该蛋白质能进一步开发为PCNA相关疾病的体外诊断试剂盒,具较大的应用价值
%K 增殖细胞核抗原
%K 杆状病毒
%K 昆虫细胞
%K 蛋白质纯化
%K 抗体结合特异性
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6237.shtml