%0 Journal Article
%T 一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达 *
%A 张洪涛
%A 易玲
%A 杨斌
%A 王小珏
%A 闫卓红
%A 韦攀健
%A 高鑫
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20180510
%X 目的:制备特异性抗人表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(scFv),鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法:从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5'RACE技术扩增轻链和重链可变区(VL、VH)基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果:获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-scFv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10 -9mol/L。 结论:成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础
%K 表皮生长因子受体
%K 单链抗体
%K 哺乳细胞表达
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6217.shtml