%0 Journal Article
%T 利用CRISPR/Cas9技术构建AEG-1基因敲除U251细胞系并探讨其转移行为的特点 *
%A 任晓璠
%A 刘昆梅
%A 左娣
%A 李斌
%A 王斌
%A 盛玉瑞
%A 郭乐
%A 马琳
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20181005
%X 星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在多种肿瘤中过表达,参与肿瘤的形成、转移等过程。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除AEG-1基因并研究其在胶质瘤细胞转移过程中的作用。首先设计构建sgRNA/Cas9二合一表达载体并转染到人胶质瘤U251细胞中,通过TA克隆测序鉴定sgRNA的活性;然后筛选建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,并利用Western blot实验检测AEG-1的敲除效率;最后利用Transwell小室、划痕实验评价AEG-1敲除后对肿瘤细胞迁移能力的影响。结果显示,成功构建靶向敲除AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体,所构建的载体与实验设计相一致,通过TA克隆测序鉴定sgRNA有活性;成功建立稳定的AEG-1敲除U251细胞系,Western blot实验结果表明敲除效率高达98%;Transwell小室实验、划痕实验结果表明AEG-1敲除U251细胞系的转移能力明显降低
%K 星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)
%K CRISPR/Cas9
%K 基因敲除
%K U251细胞
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6283.shtml