%0 Journal Article
%T 利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2 -/-*
%A 冉多良
%A 刘赛宝
%A 孟庆文
%A 李亚芳
%A 王伟
%A 王辉
%A 陈洪岩
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20190106
%X Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ)IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要。为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI=0.1),测定12h、24h、48h、72h细胞培养上清的血凝滴度及72h TCID50滴度。结果：靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2 -/-);其与亲本细胞生长速率无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12h、24h、48h、72h,MDCK-Tpl2 -/-细胞培养上清的血凝效价提高了1.78~2.5倍。病毒接种后72h,MDCK-Tpl2 -/-细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2.8倍。结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础
%K Tpl2
%K CRISPR/Cas9
%K MDCK-Tpl2 <sup>-/-</sup>细胞
%K 细胞质控
%K 禽流感病毒
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6323.shtml