%0 Journal Article %T 美洲大蠊内生菌几丁质酶基因的克隆、表达及其活性研究 * %A 张晶晶 %A 李小波 %A 王艳 %A 许敏华 %A 金小宝 %A 马艳 %J - %D 2019 %R 10.13523/j.cb.20190104 %X 目的:对美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌几丁质酶ChiA基因进行克隆、可溶性表达及功能验证。方法:PCR扩增ChiA基因,TA亚克隆,构建重组表达载体ChiA/pET21b,生物信息学分析和低温诱导表达、SDS-PAGE、Western blot鉴定,打孔法对几丁质酶活性检测。结果:PCR成功扩增了ChiA基因序列,该序列与GenBank上的S.marcescens ChiA基因序列同源性达99%;该序列编码571个氨基酸,并能够在原核系统中稳定表达。可溶性表达分析显示:通过低温诱导表达,获得可溶性的目的蛋白;活性试验发现:含目的蛋白的表达产物可分解几丁质,且活性强于美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌。结论:从美洲大蠊内生黏质沙雷氏菌基因组中成功克隆了几丁质酶ChiA基因,通过原核表达系统获得了具有较强活性的可溶性几丁质酶ChiA,为其应用奠定了基础 %K 美洲大蠊 %K 黏质沙雷氏菌 %K 几丁质酶ChiA %K 可溶性表达 %K 活性验证 %U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6321.shtml