%0 Journal Article
%T SSB蛋白的高效表达及其与ssDNA的相互作用
%A 乔惠丽
%A 文祯中
%A 毕利军
%A 阚云超
%A 陈媛媛
%J -
%D 2007
%X 大肠杆菌单链结合蛋白SSB在DNA复制、重组和修复中起着重要作用。为研究单链结合蛋白SSB的体外生物功能构建了融合蛋白SSB的表达载体并使其高效表达及易于纯化。ssb基因片段是以E.coli K-12基因组为模板经PCR扩增获得，并通过基因的体外拼接成功构建了表达载体pQE30-ssb。重组菌株M15/ pQE30-ssb经过IPTG的诱导表达了蛋白SSB。收集菌体细胞、超声波破碎后离心取上清进行SDS-PAGE分析，结果表明有一与预期分子量（20.6 kD）相应的诱导表达条带出现，其表达量约占全细胞蛋白的30％且以可溶形式存在。利用固定化金属离子（Ni2+）配体亲和层析柱纯化融合蛋白SSB，其纯度达到90％。通过凝胶层析和等离子共振技术对SSB的生物功能进行了系统研究分析。结果表明，SSB蛋白以四聚体形式与单链DNA分子结合，其亲和力常数（KD）为4.79×10-7 M
%K SSB蛋白
%K 高效表达
%K 相互作用
%K 动力学
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract1910.shtml