%0 Journal Article
%T 人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定
%A 孙曼霁
%A 朱平
%A 谭建华
%A 马兴元
%A 魏东芝
%J -
%D 2005
%X 研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达。设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1．8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达栽体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GS115中,经MD／MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P．patstoris菌22株。依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4．0mU／ml,表达量占分泌蛋白总量的23．6％
%K 人脑乙酰胆碱酯酶
%K 巴斯德毕赤酵母
%K 分泌表达
%K 酶活性鉴定
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract3302.shtml