%0 Journal Article
%T 胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素的原核表达和复性
%A 刘建东
%A 刘思国
%A 孔宪刚
%A 宫
%A 强
%A 王勇
%A 王春来
%A 赵昆
%A 迟磊
%A 邵美丽
%A 郭设平
%J -
%D 2006
%X 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA在E.coli中利用原核表达载体pGEX-6p-1进行了原核表达，表达产物rApxⅡ以包涵体形式存在。包涵体蛋白用含0.5% Triton X-100的50mmol/L Tris-HCl(PH8.0)、1mmol/L EDTA的缓冲液洗涤2～3次，再用1M NaCl 洗涤一次，然后用6mol/L的盐酸胍溶解变性。变性的蛋白溶液经稀释后用含有还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽(GSSG)以及0.5mol/L L-精氨酸的20mmol/L Tris-HCl(pH8.3)、1mmol/L EDTA 缓冲液进行透析复性，透析后的溶液用聚乙二醇20 000（PEG 20 000）浓缩，再用20mmol/L Tris-HCl(pH8.3)、1mmol/L EDTA的缓冲液透析，然后用Glutathione-Sepharose 4B 纯化试剂盒进行纯化。经溶血实验证明，经洗涤、变性和复性后的重组蛋白恢复了天然蛋白的活性， 能够溶解1% 的绵羊红细胞悬液
%K 复性
%K 原核表达
%K 胸膜肺炎放线杆菌
%K ApxⅡ毒素
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract2230.shtml