%0 Journal Article
%T hK1-L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达及其活性研究
%A 侯永敏
%A 钟翎
%A 陶建军
%A 侯永敏
%A 邓春平
%A 陶建军
%J -
%D 2011
%X 为进一步改造重组人激肽释放酶1(hK1),以期提高其生物活性,制备了通过柔性接头相连接的重组人激肽释放酶1-L-IgG1 Fc融合蛋白(hK1-L-Fc)。采用重叠延伸PCR技术构建hK1-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pcDNA3.1,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-S)中表达。利用Protein A 亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、Western blotting、飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、HPLC检测表达产物,底物法检测融合蛋白的体外活性。结果显示:成功构建pcDNA3.1-hK1-L-Fc重组表达载体;获得稳定表达融合蛋白的细胞株;无血清悬浮批式培养的表达量在0.7 mg/L以上;纯化的蛋白其纯度在95%以上,分子量约60 kDa;活性检测显示其比活性在9.2 U/mg以上,较hK1-Fc蛋白提高了18%以上
%K 激肽释放酶1
%K 融合蛋白
%K CHO细胞
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract1682.shtml