%0 Journal Article
%T Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1的原核表达、纯化及活性研究
%A 司徒永立
%A 崔宏娣
%A 彭礼飞
%A 邓莉
%A 邵正
%J -
%D 2014
%R 10.13523/j.cb.20141205
%X 目的:原核表达并制备重组蜱kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂IsKuI-1,检测其抗凝血及抑制蛋白酶活性。方法:构建pET32a-sumo/IsKuI-1原核表达质粒,并转入到E. coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析,在层析柱上用SUMO蛋白酶切割融合伴侣,纯化后得到重组目的多肽rIsKuI-1。用PT及aPTT法检测重组目的多肽的抗凝活性,发色底物法检测rIsKuI-1对丝氨酸蛋白酶的抑制活性。结果:用原核表达系统获得了rIsKuI-1,其无延长PT及aPTT活性,对人中性粒细胞弹性蛋白酶具有较好的抑制活性(IC50=1.83μM),且特异性强。结论:IsKuI-1是一种活性较好的人NE抑制剂。因此为进一步探讨rIsKuI-1的生物学功能及其作为新药开发应用奠定了基础
%K kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂
%K 原核表达
%K 中性粒细胞弹性蛋白酶
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract5496.shtml