%0 Journal Article
%T 重组Humicola insolens角质酶的高密度发酵优化 *
%A 吴敬
%A 孙益荣
%A 宿玲恰
%A 黄燕
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20190108
%X 在采用前期已构建的重组菌E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-hic进行高密度发酵制备角质酶时发现,在高诱导强度发酵时,菌体浓度下降明显。同时,通过测定纯化重组角质酶的磷脂水解活性,考察验证了重组酶对宿主细胞的损伤作用。重组酶的磷脂酰乙醇胺活性为9.8U/mg(NPB水解比活力为1 047.6 U/mg),在卵黄平板出现了明显的反应圈现象。在此基础上尝试了高菌体浓度结合高诱导强度的发酵策略,以进一步提高重组酶在3L罐中的表达水平。优化后的最佳条件及结果为:OD600为75时,恒速流加0.8g/(L ·h)的乳糖溶液,发酵24h后,酶活达到最大值4 788.0U/ml,约为摇瓶发酵酶活的28倍,与OD600为50时、流加0.2 g/(L ·h)进行诱导的发酵策略(酶活2 233.0 U/ml)相比,提高幅度约为114.0%,发酵时间缩短40.0%
%K <i>Humicola</i> <i>insolens</i>
%K 角质酶
%K 磷脂酶活性
%K 高密度发酵
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6325.shtml