%0 Journal Article
%T 人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化
%A 任哲
%A 刘凯胜
%A 刘忠
%A 卢嘉欣
%A 张嘉萱
%A 彭鑫磊
%A 王一飞
%A 王绍祥
%A 王蕊
%A 赵振岭
%A 陈伟
%A 韩波
%A 马岩岩
%J -
%D 2011
%X 摘要 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础
%K TRAP1
%K Hsp75
%K 克隆
%K 原核表达
%K 优化
%K pET-28a(+)
%K BL21
%U http://journal03.magtech.org.cn/Jweb_swjstb/CN/abstract/abstract5900.shtml