%0 Journal Article
%T 水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析 *
%A 刘存宝
%A 杨旭
%A 靳输梅
%A 马雁冰
%A 高瑞雨
%A 高福兰
%A 齐家龙
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20190803
%X 目的: 利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒 (varicella-zoster virus, VZV) 糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。 方法: 利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒 pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High Five TM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。 结果: 构建了pFastbac-VZV gE1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高gE蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。 结论: 成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础
%K 水痘带状疱疹病毒
%K 糖蛋白gE
%K 昆虫表达系统
%K 免疫原性
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6417.shtml