%0 Journal Article
%T 利用CRISPR/Cas9技术建立敲除JAK2基因K562细胞系 *
%A 张婷
%A 李丹阳
%A 梁天亚
%A 王利敏
%A 王明连
%A 菅璐
%A 马洪涛
%A 黄映辉
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20190706
%X 目的 利用CRISPR/Cas9技术对K562细胞系JAK2基因进行编辑,构建JAK2基因敲除的K562细胞系。方法 使用CRISPR在线设计工具,针对JAK2基因设计sgRNA,构建Cas9-sgRNA共表达质粒。使用第二代慢病毒包装系统包装慢病毒并感染K562细胞,提取细胞基因组DNA,Sanger测序和TA克隆检测基因编辑活性。无限稀释法将编辑阳性的细胞接种于96孔板并扩培得到单克隆细胞株,提取基因组DNA,Sanger测序和TA克隆分析敲除JAK2单克隆细胞的基因型。结果 成功构建靶向敲除JAK2基因的lentiCRISPRv2-sgRNA3-1质粒。优化方案得到低细胞毒性高转染效率的感染K562细胞慢病毒量。CRISPR/Cas9系统成功在JAK2基因sgRNA3-1识别位点发挥基因组编辑活性,获得纯合敲除JAK2基因细胞株K562-JAK2 -/-(两个等位分别发生移码突变,预期编码没有功能的JAK2蛋白)。结论 CRIAPR/Cas9系统通过慢病毒感染方式获得JAK2基因纯合敲除的K562细胞株,该细胞模型可用于研究在慢性髓系白血病中JAK2基因的作用,为构建K562敲除其他基因细胞系提供实验依据,为探究造血分化机制的研究奠定实验基础
%K CRISPR/Cas9系统
%K <i>JAK2</i>基因
%K K562细胞
%K 慢病毒
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6405.shtml