%0 Journal Article
%T CRISPR - Cas9系统介导的工业酵母营养缺陷型菌株构建 *
%A 丁娟娟
%A 孙思凡
%A 李佳蔓
%A 章小毛
%A 邹少兰
%A 陆海燕
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20191008
%X 以组氨酸营养缺陷型菌株构建为例,在前期分离、诱变和筛选得到的安琪酵母工业菌株衍生菌株K-a中试用CRISPR-Cas9系统进行基因修饰。针对菌株K-a为单倍体、ura3和对潮霉素B敏感的特点,构建了以URA3为选择标记的Cas9表达载体YCplac33-Cas9、以hphNT1为选择标记的gRNA表达载体pRS42H-gHIS1,使用PCR方法合成donor DNA片段。使用醋酸锂法制备感受态细胞K-a (YCplac33-Cas9)、将pRS42H-gHIS1和donor DNA共转化,涂布(CMG -URA+300μg/ml潮霉素B)平板,经表型筛选和PCR产物测序证明筛选平板生长菌落为目的转化子K-a (his1)的比例为74.4 %,初步建立了适于利用CRISPR/Cas 9系统进行基因修饰的工业菌株宿主平台和相应的简便、快速进行基因修饰的操作技术流程
%K 酿酒酵母
%K CRISPR-Cas9
%K <i>his1</i>
%K 基因敲除
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6452.shtml