%0 Journal Article
%T 鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体
%A 张改平
%A 游雷鸣
%A 王爱萍
%A 罗俊
%A 蒋志政
%A 郅玉宝
%A 鄂魏
%A 张改平
%A 李培培
%A 游雷鸣
%A 罗俊
%A 蒋志政
%A 郅玉宝
%A 鄂魏
%J -
%D 2011
%X 利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgM λ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgM λ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷
%K EGFP
%K H1启动子
%K RNAi载体
%K 双标记筛选
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract5228.shtml