%0 Journal Article
%T 人表皮角质形成细胞自噬功能细胞模型的构建及鉴定
%A 张战凤
%A 朱华宇
%A 朱雄翔
%A 汤朝武
%A 白晓智
%A 胡大海
%A 苏映军
%A 董茂龙
%A 蔡维霞
%A 韩军涛
%A 张战凤
%A 朱华宇
%A 朱雄翔
%A 汤朝武
%A 白晓智
%A 石继红
%A 苏映军
%A 董茂龙
%A 蔡维霞
%A 韩军涛
%J -
%D 2011
%X 目的: 建立稳定表达GFP-LC3的人永生化角质形成细胞HaCaT细胞系。方法: 将构建的pcDNA3.1-GFP-LC3 真核表达载体转入HaCaT细胞,经G418筛选稳定表达的细胞系。HaCaT细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Western blot方法检测,并利用该稳定表达的细胞系观察验证Rapamycin对细胞发生自噬透射电镜超微结构的变化。结果: 获得了3株转染并经G418反复筛选的HaCaT细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光细胞的表达率在95% 以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达。Western blot和激光共聚焦显微镜均证明Rapamycin可以诱导自噬的发生。透射电镜细胞超微结构的观察表明Rapamycin可以有效地诱导HaCaT-LC3细胞自噬的发生。结论: 成功构建GFP-LC3稳定表达的HaCaT系,该细胞系可以作为研究人角质形成细胞自噬功能的一种细胞模型
%K GFP-LC3
%K 基因转染
%K HaCaT细胞
%K 稳定表达
%K 自噬
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract5247.shtml