%0 Journal Article
%T 胆固醇氧化酶PsCO4异源表达、纯化及酶学性质分析 *
%A 田之仓优
%A 秦慧民
%A 程晓涛
%A 路福平
%A 郭倩倩
%A 高登科
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20180605
%X 胆固醇氧化酶专一性催化胆固醇为胆甾-4-烯-3-酮,广泛的应用于临床以及食品加工行业。本论文将来源于Pimelobacter simplex的胆固醇氧化酶PsCO4,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)、Rosetta(DE3)和C41(DE3)中,在不同温度(15℃、25℃、37℃)及IPTG诱导浓度(0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L)下异源表达PsCO4。结果表明,转入Rosetta(DE3)菌株的PsCO4蛋白,在IPTG浓度为0.1mmol/L、15℃下经18h诱导表达,PsCO4可溶性表达量最高(0.63mg/ml)。异源表达的胆固醇氧化酶PsCO4最适温度为30℃,最适pH为7.5。通过TLC, GC-MS检测出PsCO4催化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮。以胆固醇和β-谷甾醇、豆甾醇和孕烯醇酮为底物,测定PsCO4对四种底物的催化反应动力学参数,胆固醇kcat/Km为0.08s -1·μM -1分别高于β-谷甾醇(0.04s -1·μM -1)、豆甾醇(0.005s -1·μM -1)和孕烯醇酮(0.02s -1·μM -1)
%K 胆固醇氧化酶
%K 催化活性
%K 酶学性质
%K 底物特异性
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6225.shtml