%0 Journal Article
%T 重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究
%A 刘晓
%A 张潘潘
%A 李素霞
%A 王之可
%A 许延吉
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20180508
%X 目的:研究R122位点突变重组猪胰蛋白酶,与野生型酶相比较,该位点对重组猪胰蛋白酶(RPT)性质的影响。方法:以毕赤酵母GS115作为表达宿主,对RPT、突变体mRPT(R122H)和 mRPT(R122H/R73G/R130T)进行表达及纯化。并对其性质和稳定进行对比研究。结果:重组胰蛋白酶及其突变体在毕赤酵母中均获得了高效表达。相对于RPT,突变体mRPT(R122H)和 mRPT(R122H/R73G/R130T)在以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯 (BAEE)为底物时,具有更强底物结合力,三者的米氏常数分别为18.8μmol/L、9.0μmol/L和11.0μmol/L;两突变体耐高温耐碱能力增强;在Ca 2+存在及去除的条件下,突变体具有更强的抗自降解能力。 结论:可以利用毕赤酵母高效表达重组胰蛋白酶及其突变体。mRPT(R122H)和mRPT(R122H/R73G/R130T) 相对于野生型RPT,对高pH条件和高温的耐受性增强,该稳定性的提高主要归因于R122位点的突变
%K 重组猪胰蛋白酶
%K 毕赤酵母
%K 突变体
%K mRPT(R122H)
%K mRPT(R122H/R73G/R130T)
%K 性质
%K 稳定性
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6215.shtml