%0 Journal Article
%T 肝脏特异性CD36基因敲除小鼠的制备及鉴定 *
%A 张晓玉
%A 曾晗
%A 杨萍
%A 苏春晓
%A 阮雄中
%A 陈压西
%J -
%D 2018
%R 10.13523/j.cb.20180804
%X 目的:运用Cre/Loxp重组酶系统构建肝脏特异性CD36基因敲除小鼠并进行鉴定和验证,为研究CD36的生物学功能奠定基础。方法:构建CD36打靶载体,电转转染胚胎干细胞,通过长链PCR筛选出正确同源重组的阳性克隆,阳性胚胎干细胞克隆经扩增后,注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合小鼠,再与Flp小鼠交配筛选获得Flox杂合子小鼠,该小鼠与引进的Alb-Cre小鼠交配,在F3代获得CD36fl/fl:Alb-Cre+基因型小鼠,即为肝脏特异性CD36敲除小鼠。采用PCR鉴定小鼠基因型,PCR、实时荧光定量PCR和Western blot验证小鼠肝脏CD36敲除效果,Western blot检测小鼠肾脏、脂肪和心肌组织CD36表达情况,HE染色观察小鼠肝脏形态学改变。结果:建立了CD36基因的Flox杂合子小鼠,与Alb-Cre小鼠交配后,在F3代筛选出CD36fl/fl:Alb-Cre-和CD36 fl/fl:Alb-Cre +基因型小鼠,DNA水平证实CD36 fl/fl:Alb-Cre +基因型小鼠肝脏CD36基因通过Cre/Loxp重组酶系统被敲除。与CD36 fl/fl:Alb-Cre -基因型小鼠相比,CD36 fl/fl:Alb-Cre +基因型小鼠肝脏CD36mRNA和蛋白表达水平显著降低,肾脏、脂肪和心肌组织CD36蛋白表达无差别,肝脏形态学特征无明显差异。结论:通过Cre/Loxp重组酶系统成功构建了肝脏特异性CD36基因敲除小鼠,为研究CD36在肝脏代谢和肝脏疾病中的功能提供了动物模型
%K CD36基因
%K 基因敲除
%K Cre/Loxp
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6254.shtml