%0 Journal Article
%T 一种来源于大菱鲆的热敏型尿嘧啶DNA糖苷酶的克隆表达及酶学性质鉴定 *
%A 丁亚芳
%A 卢辰
%A 张坤晓
%A 许恒皓
%A 郦娟
%A 韩挺翰
%A 高嵩
%A 龚雪梅
%J -
%D 2019
%R 10.13523/j.cb.20191005
%X 目的 尿嘧啶DNA糖苷酶UDGase是一种广泛应用于qPCR、二代测序等领域的工具酶,由于其应用特性,只有热敏性UDGase才具有较大开发利用潜力。目前全球热敏性UDGase工具酶仅有2个物种来源,均有专利保护且价格昂贵,亟待开发新来源且具有优良热敏特性的UDGase。方法 根据前人研究及序列分析推测大菱鲆(Scophthalmus maximus)具有热敏性UDGase。经验证,大菱鲆肝脏匀浆呈现UDGase活性。从大菱鲆肝脏匀浆克隆得到大菱鲆UDGase基因SmUDGase,并使用大肠杆菌工程菌株实现重组表达,分离纯化后进行活力表征检测。结果 序列比对结果表明,SmUDGase基因克隆成功。重组表达并经亲和层析、离子交换层析分离纯化,获得纯酶纯度约95%,产率1.51mg/L,比活力2 295.08U/mg。SmUDGase具有热敏性,在40℃时酶活即开始迅速降低。其他酶学性质,如pH适应范围、金属离子依赖性和对抑制剂的敏感性均与当前商业化UDGase一致。结论 成功克隆并鉴定来自大菱鲆的新来源SmUDGase,该酶具有热敏感性,酶学特性接近目前商业化UDGase。并探索该酶的重组表达和纯化工艺,所得纯酶基本达到商业化生产水平,为该类型生物工具酶的开发提供了理论参考和技术储备
%K 尿嘧啶DNA糖苷酶
%K 大菱鲆
%K 热敏性
%K 重组表达
%U http://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/abstract/abstract6449.shtml