%0 Journal Article
%T HEP-Flury株病毒辅助质粒包装CTN株病毒基因组拯救狂犬病病毒
%A 唐青
%A 扈荣良
%A 黄莹
%J 中华流行病学杂志
%D 2009
%X 目的以CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒(pCTN-GFP)和HEP-Flury株病毒N、P、L辅助质粒共转染拯救具有活性的CTN株重组狂犬病病毒(CTN-GFP)。方法将CTN株狂犬病病毒全长基因组分4段进行扩增，体外连接扩增片段并克隆入表达载体中，构建CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒，基因组ψ基因被标识基因GFP取代，通过与HEP-Flury株病毒N、P、L3个辅助质粒共转染BHK-21细胞，拯救能够稳定表达GFP的重组病毒CTN-GFP。结果成功扩增全长基因组的4个基因片段，并将其克隆入表达载体，构建了CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒pCTN-GFP，经酶切鉴定和序列测定证明pCTN-GFP为正确克隆，可直接用于病毒拯救。将pCTN-GFP与HEP-Flury株病毒辅助质粒共转染BHK-21细胞4d后，成功拯救出CTN株重组狂犬病病毒，重组病毒能够表达标识基因GFP，荧光显微镜下可直接观察到标识基因GFP的表达，设计跨GFP和L基因的特性引物对重组病毒进行RT-PCR检测，结果证明此病毒是从克隆的质粒中拯救的重组病毒。结论HEP-Flury株病毒的结构蛋白能够包装并转录CTN株病毒的基因组RNA
%K 狂犬病病毒
%K 基因组
%K 结构蛋白
%K 病毒拯救
%U http://chinaepi.icdc.cn/zhlxbx/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20090521&flag=1