%0 Journal Article
%T 小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶调控机制及AmpD蛋白对AmpCβ-内酰胺酶表达的作用
%A 张婧
%A 景怀琦
%A 梁俊容
%A 段然
%A 王鑫
%A 秦帅
%A 肖萌
%J 中国预防医学杂志
%D 2018
%X 目的 研究小肠结肠炎耶尔森菌β-N-乙酰葡萄糖胺酶（NagZ）的调控机制及AmpD蛋白对AmpC β-内酰胺酶表达的作用。 方法 通过对小肠结肠炎耶尔森菌3个AmpD蛋白同系物（AmpD1~3）基因（ ampD 1~3）、低分子量青霉素结合蛋白（LMM PBPs）基因（ pbp 4、 pbp 5 a 、 pbp 5 b 、 pbp 7）、NagZ基因（ nagZ ）以及 ampR 基因进行敲除或回补，以构建基因突变株，并利用头孢西丁对突变株进行诱导；采用检测头孢硝噻吩水解法测定诱导组和非诱导组突变株AmpC β-内酰胺酶活性（单位为U），采用 luxCDABE reporter系统检测AmpC β-内酰胺酶启动子活性[单位为相对光单位（RLU）]，采用对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为显色底物测定NagZ酶活性（单位nmol/L）。 结果 AmpD1蛋白的功能较强，YEΔD1突变株的AmpC β-内酰胺酶表达量出现上升，诱导组和非诱导组分别为（3.29±1.58）和（4.08±1.75）U。YEΔ5b、YEΔ4Δ5b、YEΔ5aΔ5b和YEΔ5bΔ7突变株AmpC β-内酰胺酶启动子活性增强，其中YEΔ4Δ5b突变株活性最高，诱导组和非诱导组分别为（106 903.16±61 910.61）和（205 427.45±45 352.17）RLU。缺失3种基因的菌株中，YEΔ4Δ5bΔ7突变株AmpC β-内酰胺酶启动子活性最高，诱导组和非诱导组分别为（304 108.04±99 274.53）和（531 440.21±68 891.02）RLU；缺失4种基因的菌株中，YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7突变株AmpC β-内酰胺酶启动子活性最高，诱导组和非诱导组分别为（1 013 810.99±260 955.96）和（1 230 214.59±205 526.79）RLU；敲除 nagZ 基因后，YEΔD1D2D3ΔZ突变株AmpC β-内酰胺酶活性未发生明显的变化，而YEΔ4Δ5aΔ5bΔ7ΔZ突变株活性下降明显，诱导组和非诱导组分别为（0.30±0.20）和（0.29±0.21）U，基本降至野生株水平。 结论 在肠杆菌科细菌中发现多个AmpD蛋白参与 ampC 基因的三级调控机制；发现以PBP5b为主，PBP4、PBP5a和PBP7共同参与的 ampC 基因调控模式；同时还证实了在小肠结肠炎耶尔森菌具有NagZ依赖和非依赖两种 ampC 基因调控途径
%K 耶尔森菌
%K 小肠结肠炎
%K 青霉素结合蛋白质类
%K N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶
%K 氨苄青霉素头孢菌素酶
%K β-N-乙酰葡萄糖胺酶
%U http://www.pubhealth.org.cn/cn/wxshow.asp?id=5859