%0 Journal Article
%T 双须骨舌鱼卵黄蛋白原基因vtg的克隆、组织表达和原核表达分析
%A 刘奕
%A 周康奇
%A 宋红梅
%A 杨叶欣
%A 潘贤辉
%A 牟希东
%A 胡隐昌
%A 郑曙明
%J 动物学杂志
%D 2018
%R 10.13859/j.cjz.201804011
%X 为探究双须骨舌鱼（Osteoglossum bicirrhosum）卵黄蛋白原vtg基因的结构和表达特征，本研究运用RACE技术克隆双须骨舌鱼vtg全长cDNA序列。序列分析发现，双须骨舌鱼vtg的cDNA全长为5 325 bp，开放阅读框（ORF）为5 121 bp，其5′和3′非编码区（UTR）分别为46 bp和159 bp，共编码1 706个氨基酸，预测蛋白质分子量约为186.79 ku。同源性分析发现，双须骨舌鱼与同科的美丽仆骨舌鱼（Scleropages formosus）相似度达到84.78%，与鲤形目、鲈形目、鲱形目、鲽形目鱼类的相似度均高于50%。系统进化树分析结果显示，本文获得的双须骨舌鱼vtg基因与骨舌鱼目聚为一类，与鳗鲡目硬骨鱼类亲缘关系较近，与双须骨舌鱼进化地位相符。荧光定量PCR检测结果表明，在雌雄鱼性腺和肝中vtg均有表达，且在雌鱼肝中的相对表达量显著高雄鱼（P < 0.05），卵巢和精巢表达量显著差异（P > 0.05）；在雌雄鱼鳃、脾、肾、肌肉、心、头肾、脑等7个组织中均极微量表达，且显著差异（P > 0.05）。在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢中vtg相对表达量依次增加，Ⅳ期显著高于Ⅱ和Ⅲ期（P < 0.05），也显著高于精巢Ⅳ期（P < 0.05）；在雌鱼肝组织中呈先增后减趋势，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期之间显著差异（P > 0.05），但每个时期都显著高于雄性（P < 0.05）。成功构建了原核表达载体pEASY-BluntE2-vtg，并转入Transetta（DE3）表达感受态细胞中成功诱导出融合蛋白。Western-blotting检测显示，融合蛋白可被抗His标签特异性识别。综上表明，vtg表达水平高低与性别相关，并与性腺发育程度有关。此外，本研究结果也为后续深入研究卵黄蛋白原的生理功能打下基础
%K 双须骨舌鱼 卵黄蛋白原 克隆 组织表达 原核表达
%U http://dwxzz.ioz.ac.cn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=17198&flag=1