%0 Journal Article
%T pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293 细胞系中的表达
%A 侯赋园
%A 李 竣
%A 王德彬
%A 徐 婧
%A 杨光忠
%A 胡 鑫
%J 中南民族大学学报(自然科学版)
%D 2018
%R 10.12130/znmdzk.20180307
%X 目的：构建pEGFP-C1-MCH真核表达载体，并将其转染入HEK293细胞中，筛选阳性细胞克隆，为研究MCH基因在能量代谢中的功能及机制提供细胞模型. 方法：提取脑组织总RNA，反转录为cDNA，参照Genbank中提供的序列设计引物扩增MCH基因全长.再将该基因全长cDNA克隆至质粒pEGFP-C1，经菌落PCR筛选及双酶切和DNA测序鉴定，成功构建了含有目的基因MCH的重组质粒pEGFP-C1-MCH. 并利用脂质体2000介导其转染HEK293细胞,用荧光显微镜和RT-PCR检测EGFP和MCH在细胞中的表达.结果：克隆的pEGFP-C1-MCH质粒序列中的MCH与GenBank相符；细胞转染72 h后，转染成功的细胞在荧光显微镜下表达较强的绿色荧光，MCH基因稳定表达.结论：pEGFP-C1-MCH真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的稳定表达，为研究MCH基因在能量代谢中的功能及作用机制提供了实验模型
%K 黑色素聚集激素 绿色荧光蛋白 pEGFP-C1 转染 HEK293
%U http://znzk.scuec.edu.cn/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20180307&flag=1