%0 Journal Article
%T 绿竹ISSR-PCR反应体系的建立与优化
%A 徐雯
%A 瞿印权
%A 陈剑成
%A 何天友
%A 荣俊冬
%A 陈礼光
%A 郑郁善
%J 江苏农业科学
%D 2017
%X 以绿竹基因组DNA为ISSR-PCR扩增模板，采用单因素试验方法，对dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA设置7个不同浓度梯度进行研究，并对退火温度和循环次数进行筛选，建立绿竹ISSR-PCR最佳反应体系和扩增程序，并利用优化后的体系对100条ISSR引物进行筛选。最终确定的最佳反应体系为：20 μL的扩增体系中，dNTPs浓度为0.2 mol/L，Mg2+浓度为2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶用量为1.0 U，引物浓度为0.4 μmol/L，DNA用量为50 ng，10×PCR buffer体积为2 μL、剩余体积用灭菌ddH2O补全。扩增程序为：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性45 s，(根据引物的退火温度)复性30 s，72 ℃延伸90 s，循环38次；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。以此体系为基础进行引物筛选，在100条ISSR引物中筛选出14条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。本研究建立了绿竹ISSR-PCR最佳反应体系并筛选出高多态性引物，为绿竹的指纹图谱、遗传多样性分析、分子育种和品种鉴定等研究提供了基础
%K 绿竹
%K ISSR
%K 反应体系
%K 扩增程序
%K 引物筛选
%U http://www.jsnykx.cn/oa/DArticle.aspx?type=view&id=201715008