%0 Journal Article
%T siRNA干扰绵羊胚胎成纤维细胞Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率
%A 刘守仁
%A 王新华
%A 王玉霜
%A 皮文辉
%A 简子健
%A 黄兰兰
%A 王伟
%J 遗传
%D 2016
%R 10.16288/j.yczz.16-074
%X 摘要: 在动物细胞中,抑制非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)修复途径,可以提高同源重组(Homologous recombination, HR)修复基因组双链断裂(Double-strand brakes, DSBs)的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的HR效率,针对NHEJ修复途径中的关键因子Lig4(DNA ligase 4)基因,本文设计合成4个具有靶向性的siRNA(Small interfering RNA)。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入siRNA,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测,筛选出有效抑制Lig4基因表达的2个siRNA。应用质粒重连法检测HR修复效率,将I-SceⅠ酶线性化的HR质粒和siRNA共转染绵羊胚胎成纤维细胞,经72 h培养及流式细胞仪检测,与对照组细胞比较,结果表明HR质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰Lig4基因的表达可提高HR质粒重连效率,为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础
%K siRNA
%K Lig4基因
%K 同源重组
%K 绵羊胚胎成纤维细胞
%U http://www.chinagene.cn/CN/10.16288/j.yczz.16-074