%0 Journal Article
%T 基于Tet-on系统的RFP基因表达载体构建及其功能验证
%J 西北农林科技大学学报(自然科学版)
%D 2017
%X 【目的】构建四环素诱导表达调控系统的表达载体，并对其功能进行验证。【方法】利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1构建带有红色荧光蛋白（red fluorescence protein，RFP）基因的载体pTRE-DSred，用其与另一载体pTet-on共转染293T细胞，并加入不同质量浓度(0，0.1，1，10 μg/mL)的强力霉素（doxycycline，DOX）诱导，以未经质粒转染的293T细胞为对照组，在荧光显微镜下观察RFP基因的表达情况。【结果】成功构建了pTRE-DSred重组质粒，将其与pTet-on质粒共转染293T细胞，在细胞培养液中分别添加0.1，1，10 μg/mL DOX，48 h后均有红色荧光蛋白的表达，但10 μg/mL DOX组红色荧光蛋白的表达水平明显低于前2个组；0 μg/mL DOX诱导组中也有红色荧光蛋白表达，但水平极低；在未转染质粒对照组中未观察到红色荧光蛋白的表达。RT-PCR结果显示，pTRE-Dsred和pTet-on共转染组均检测到RFP基因的转录。【结论】成功构建了Tet-on系统RFP基因表达载体，适宜质量浓度的DOX诱导有助于目的基因的高水平表达，但在不添加DOX诱导剂时，该Tet-on系统存在目的基因低渗漏表达现象
%K 红色荧光蛋白基因 Tet-on系统 强力霉素 载体构建
%U http://www.xnxbz.net/xbnlkjdxzr/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20170806&flag=1