%0 Journal Article
%T 猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究
%J 西北农林科技大学学报(自然科学版)
%D 2016
%X 【目的】研究猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列，分别设计合成1对特异性引物，通过RT-PCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增ORF3a和ORF3b基因，经克隆测序后，将其基因序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性分析，构建系统进化树并进行遗传变异分析，然后将ORF3a和ORF3b基因亚克隆至真核表达载体，构建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag载体，转染293T细胞进行表达，利用flag标签抗体对2个基因的蛋白表达情况进行Western blot分析。【结果】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与其他毒株间核苷酸的同源性为92.6%～100%，ORF3b基因与其他毒株间核苷酸的同源性为98.6%～99.7%。Western blot结果表明，ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子质量约为8 ku和28 ku。【结论】TGEV HN-2012株的ORF3a基因与CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等亲缘关系较近，ORF3b基因与TS株、Miller M6株等亲缘关系较近，与我国其他毒株关系较远；成功实现了ORF3a和ORF3b蛋白在293T细胞中的表达
%K TGEV 河南分离株（HN-2012） ORF3a和ORF3b基因 293T细胞 真核表达
%U http://www.xnxbz.net/xbnlkjdxzr/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20160402&flag=1