%0 Journal Article
%T 核定位信号肽偶联核激酶底物短肽修饰壳聚糖介导微小 RNA-140 对兔关节软骨细胞作用的研究
%A 孙艳丽
%A 宋伟
%A 彭效祥
%A 李倩
%A 王鲁娟
%A 赵荣兰
%J -
%D 2017
%R doi:10.7507/1002-1892.201705088
%X 目的 探讨核定位信号肽偶联核激酶底物短肽（nucleus localization signal linked nucleic kinase substrate short peptide，NNS）修饰壳聚糖（chitosan，CS）（NNSCS），介导人微小 RNA-140（microRNA-140，miR-140）基因转染，对体外培养的兔关节软骨细胞的作用。 方法 将重组质粒 GV268-miR-140 和空质粒 GV268 分别与 NNSCS 复合形成 NNSCS/pDNA 纳米复合物。取新生新西兰大耳白兔膝关节软骨，采用胰蛋白酶和胶原酶联合消化法分离培养原代软骨细胞。取第 2 代软骨细胞分为 3 组：正常细胞对照组（A 组）、NNSCS/GV268 空质粒转染组（B 组）、NNSCS/GV268-miR-140 转染组（C 组），B、C 组细胞分别以 NNSCS/GV268 及 NNSCS/GV268-miR-140 纳米复合物瞬时转染。转染后，实时荧光定量 PCR（real-time fluorescent quantitative PCR，RT-qPCR）检测外源 miR-140 的表达；Annexin Ⅴ-FITC/PI 双染色法及 MTT 法分别检测外源 miR-140 对软骨细胞凋亡及增殖活力的影响；RT-qPCR 检测软骨细胞中 Sox9、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、组蛋白去乙酰化酶 4 （histone deacetylase 4，Hdac4）基因表达。 结果 RT-qPCR 检测示，C 组外源 miR-140 表达水平较 A、B 组明显上调（P<0.05）。与 A、B 组比较，C 组软骨细胞凋亡率明显降低，细胞增殖活力明显增加，细胞内 Sox9、Aggrecan 基因相对表达量明显上调、Hdac4 基因相对表达量明显下调（P<0.05）；A、B 组间以上指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 NNSCS 可携带外源基因进入软骨细胞并高效表达，高表达的 miR-140 能提高体外培养软骨细胞的生物活性，为其用于治疗软骨损伤性疾病提供了实验依据
%K 微小RNA-140
%K 壳聚糖
%K 软骨细胞
%K 信号肽
%K 兔
%U http://www.rrsurg.com:80/article/10.7507/1002-1892.201705088