%0 Journal Article
%T 慢病毒介导 NEP1-40 及 NT-3 双基因转染神经干细胞的实验研究
%A 丰干均
%A 刘立岷
%A 周春光
%A 宋跃明
%A 杨曦
%A 汪雷
%J -
%D 2018
%R doi:10.7507/1002-1892.201710079
%X 目的通过慢病毒载体将 NEP1-40（Nogo extracellular peptide residues 1-40）及神经营养因子 3（neurotrophin 3，NT-3）双基因转染入神经干细胞（neural stem cells，NSCs）内进行表达，探讨 NEP1-40 及 NT-3 双基因转染 NSCs 的可行性，为 NSCs 体内实验奠定基础。方法将 SD 大鼠胚胎室管膜区 NSCs 采用空载慢病毒载体（A 组）、NEP1-40 慢病毒载体（B 组）、NT-3 慢病毒载体（C 组）及 NEP1-40 和 NT-3 慢病毒载体（D 组）进行转染，以未转染病毒的细胞作为对照组（E 组）。用感染复数（multiplicity of infection，MOI）为 5、10、15 的慢病毒载体分别转染 24、48、72 h，荧光显微镜观察转染后细胞内荧光表达情况，确定慢病毒载体的最佳 MOI 和收样时间。再分别通过实时荧光定量 PCR 及 Western blot，检测转染后细胞中 NEP1-40 及 NT-3 基因的表达，以及细胞和培养基中 NEP1-40 及 NT-3 蛋白的表达。结果荧光显微镜观察示，MOI 为 10 时 NEP1-40 和 NT-3 基因慢病毒载体在 NSCs 内转染率最高，最佳时间为转染 48 h 时。实时荧光定量 PCR 及 Western blot 检测示，B、D 组 NEP1-40 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于 A、C 组，差异有统计学意义（P<0.05）；A、C 组间及 B、D 组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。C、D 组 NT-3 mRNA 相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于 A、B 组，差异有统计学意义（P<0.05）；A、B 组间和 C、D 组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论通过慢病毒载体可将 NEP1-40 及 NT-3 双基因成功转染入 NSCs 内，在 NSCs 内稳定表达，且两种目的基因在表达过程中无相互拮抗或促进作用
%K 神经干细胞
%K NEP1-40
%K 神经营养因子 3
%K 慢病毒载体
%K 转染
%U http://www.rrsurg.com:80/article/10.7507/1002-1892.201710079