%0 Journal Article %T 重组毕赤酵母植酸酶N-糖基化位点质谱鉴定<br>Identification of N-glycosylation sites of recombinant phytases from Pichia pastoris by mass spectrometry %A 张 琪 %A 吴秀菊 %A 俞 婷 %A 王志林 %A 崔百元 %A 朱庆锋 %A 贝锦龙< %A br> %A ZHANG Qi %A WU Xiuju %A YU Ting %A WANG Zhilin %A CUI Baiyuan %A ZHU Qingfeng %A BEI Jinlong %J 华中师范大学学报(自然科学版) %D 2018 %X 为系统评估重组毕赤酵母植酸酶的N-糖基化充分性,建立了一种通过联用高效液相色谱-串级质谱来分析植酸酶氨基酸序列及N-糖基化位点的技术.分别发酵了3株基因组已整合不同植酸酶基因的毕赤酵母.发酵液上清经离子交换与凝胶过滤后获得纯化的植酸酶.使用PNGase F或Endo H脱糖基化酶处理植酸酶后,用胰蛋白酶消化脱糖基化产物.通过纳升级高效液相色谱分离胰蛋白酶切产生的肽段混合物.并在联用的串级质谱上进行肽段测序与N-糖基化位点鉴定.结果显示3种植酸酶蛋白的可检测序列覆盖率均在69%以上,且与文献报道不同,均存在糖基化位点修饰不充分的现象.本实验结果证明了高效液相色谱-串级质谱联用法检测植酸酶N-糖基化位点的有效性,并为植酸酶的糖基化研究提供了新的基础.<br %K 植酸酶 %K N-糖基化 %K 质谱 %K 毕赤酵母 %K < %K br> %K phytase %K N-linked glycosylation %K mass spectrometry %K Pichia pastoris %U http://journal.ccnu.edu.cn/zk/CN/abstract/abstract8136.shtml