%0 Journal Article
%T 抑制酪氨酸激酶Src对血管紧张素Ⅱ诱导足细胞损伤的保护作用 Protective Effect of Src Inhibition on Angiotensin Ⅱ Induced Podocyte Injury
%A 王思远
%A 苏可
%A 严苗
%A 陈铖
%J 武汉大学学报（医学版）
%D 2016
%X 目的:通过调控足细胞Src激酶的表达,观察足细胞表型的改变;并探讨Src激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中的作用。方法:体外培养条件永生化小鼠足细胞(MPCs),并分组如下:A:正常对照组;B:Src激酶干扰RNA(siRNA)组;C:PP2(Src激酶抑制剂)组;D:AngⅡ组;E:AngⅡ+Src激酶siRNA组;F:AngⅡ+PP2组。采用免疫印迹法检测Src激酶及其磷酸化水平;AnnexinⅤ-FITC/PI双染及Hoechst染色法检测细胞凋亡;荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架;划痕实验进行细胞运动性分析。结果:1免疫印迹法示:应用Src激酶siRNA或PP2干预MPCs后,Src激酶表达较A组下降(P<0.05);AngⅡ处理后,MPCs内Src激酶生成与A组相比明显增多(P<0.05);Src激酶siRNA或PP2干预MPCs可减少AngⅡ上调的Src激酶表达(P<0.05)。2 AngⅡ诱导MPCs内Src激酶及其磷酸化形式表达的升高,在一定范围内呈时间及浓度依赖性。3Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst染色法两种方法显示:A组、B组与C组MPCs凋亡无明显差异(P>0.05);AngⅡ干预后,MPCs凋亡较A组增加(P<0.05);Src激酶siRNA或PP2可减轻AngⅡ诱导的MPCs凋亡(P<0.05)。4荧光显微镜观察FITC-鬼笔环肽染色的细胞骨架:A组、B组与C组MPCs的F-actin呈微丝样结构,聚集成束,沿细胞长轴分布,形成应力纤维;D组F-actin发生重组,微丝样结构消失,排列紊乱,F-actin沿胞体外周分布,形成F-actin环;E组及F组较D组骨架重组有所减轻。5B组及C组与A组相比,MPCs运动性降低(P<0.05);D组MPCs运动性较A组增加(P<0.05);E组及F组较D组MPCs运动性降低(P<0.05)。结论:AngⅡ刺激MPCs胞内Src激酶和p-Src(Tyr 416)激酶表达增加,并在一定范围内呈时间及浓度依赖性。AngⅡ诱导MPCs凋亡增加、骨架改变、运动性增强;该过程与AngⅡ引起Src激酶和p-Src(Tyr 416)激酶生成增加有关。降低细胞内Src激酶浓度,可减轻AngⅡ诱导的MPCs损伤。降低对照组MPCs胞内Src激酶浓度,MPCs运动性降低,但未观察到细胞凋亡、细胞骨架改变
%K 足细胞
%K 血管紧张素Ⅱ
%K 细胞凋亡
%K 细胞骨架
%K Src激酶
%U http://hbyk.cbpt.cnki.net/WKC/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=52d85172-6a4e-4be0-ba1e-9a738470b3ec