%0 Journal Article
%T 靶向心肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建 Construction and Efficacy Evaluation of the siRNA Expression Vector Targeting the TLR4 Gene of Cardiomyocytes
%A 郑勇萍
%A 李梦云
%A 柯剑娟
%A 吴云
%A 何祥虎
%A 张宗泽
%A 王焱林
%J 武汉大学学报（医学版）
%D 2016
%X 目的:设计合成有效靶向Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)表达载体,且挑选TLR4基因稳定沉默心肌细胞。方法:依据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以TLR4基因为靶基因,合成3对小发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,经退火、与线性化pSilence 2.1-U6neo质粒连接、酶切、测序并鉴定。脂质体法转染心肌细胞,新霉素(G418)加压筛选并收集稳定表达质粒的心肌细胞,并观察光镜下心肌细胞形态。RT-PCR及Western Blot法检测收集的心肌细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果:测序鉴定插入发夹样序列正确,成功构建了TLR4基因siRNA表达载体;并获得了稳定沉默TLR4的心肌细胞。未见细胞毒性形态学改变。多种方法均证实siRNA作用于TLR4基因后,心肌细胞TLR4 mRNA和蛋白表达均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最强。结论:成功构建了靶向TLR4基因siRNA表达载体,并有效抑制心肌细胞TLR4表达
%K Toll样受体4
%K RNA干扰
%K RNA
%K 小分子干扰
%K 心肌细胞
%U http://hbyk.cbpt.cnki.net/WKC/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=280a0001-f2ec-45e0-ade8-067665cb99e7