%0 Journal Article
%T 慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响 Effects of Exogenous PON1 Expressed by Lentivirus Vector on Macrophages
%A 孟冰
%A 徐延勇
%A 程力维
%A 曹佳
%A 杜芬
%A 喻红
%J 武汉大学学报（医学版）
%D 2015
%X 目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响。方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为PmeⅠ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定。磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,Western Blotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性。含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平。结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80%-90%)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P<0.01)。结论:pWPI-PON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应
%K 对氧磷酯酶1
%K 慢病毒载体
%K 巨噬细胞
%K TNF-α
%U http://hbyk.cbpt.cnki.net/WKC/WebPublication/paperDigest.aspx?paperID=6e4a8a7a-2651-4533-b3d6-df70bd8c1da4